توضیحات محصول
پپسین از مخاط معده خوک 1گرمی کدP7012سیگما
Pepsin from porcine gastric mucosa P7012 Sigma
مترادف/نام های دیگر: پپسین A، پپسین از معده خوک
مشخصات پپسین از مخاط معده خوک 1گرمی کدP7012سیگما:
فرم
پودر لیوفیلیزه
سطح کیفیت
300
فعالیت ویژه
≥2500 واحد در هر میلیگرم پروتئین (E1%/280)
مول وزن
35 کیلو دالتون
رنگ
سفید مایل به زرد تا زرد
حلالیت
آب دیونیزه: محلول 10 میلیگرم در میلیلیتر
10 میلیمولار HCl: محلول 4 میلیگرم در میلیلیتر (سرد)
شماره دسترسی UniProt
P00791
کاربرد(ها)
تولید سنجش تشخیصی
دمای نگهداری
-20 درجه سانتیگراد
از برش پپسین میتوان برای تولید قطعات F(ab′)2 آنتیبادیها استفاده کرد. پپسین در www.sigma-aldrich.com/enzymeexplorer.
پسین یک پپتیداز است که برای هضم پروتئینها استفاده میشود و معمولاً در تهیه قطعات Fab از آنتیبادیها استفاده میشود. پپسین، از مخاط معده خوک، برای هیدرولیز نمونههای خشک دهانه رحم در موشها استفاده شده است [1].
آنزیم سیگما در هضم گلیادین گندم خام استفاده شده است.[2] این آنزیم به همراه سایر آنزیمها برای نشان دادن اثرات تثبیت و هضم آنزیمی در سنجشهای ایمونوهیستوشیمی، با استفاده از بافتهای پارافینی، استفاده شده است.[3] از آن برای هضم (قبل از استفاده از تکنیکهای ایمونوپراکسیداز) برای کاهش رنگآمیزی پسزمینه غیر اختصاصی در بخشهایی از بافتهای برونش استفاده شده است.[4] این آنزیم همچنین در تهیه قطعه F(ab)2 از IgG استفاده شده است.
اقدامات بیوشیمیایی/فیزیولوژیکی
پپسین پیوندهای پپتیدی را هیدرولیز میکند، نه پیوندهای آمیدی یا استری. پپسین پپتیدها را با یک اسید آروماتیک در دو طرف پیوند پپتیدی میشکند. اسیدهای آمینه حاوی گوگرد، هنگامی که نزدیک به پیوند پپتیدی هستند، حساسیت به هیدرولیز را افزایش میدهند. پپسین ترجیحاً در سمت کربوکسیل فنیلآلانین و لوسین و در سمت کربوکسیل باقیماندههای اسید گلوتامیک میشکند. پیوندهای Phe-Val، Gln-His، Glu-Ala، Ala-Leu، Leu-Tyr، Tyr-Leu، Gly-Phe، Phe-Phe و Phe-Tyr را در زنجیره β انسولین میشکند. پپسین آنزیم پروتئولیتیک اصلی تولید شده در معده است. پروتئینها را از طریق شکافتن پیوندهای پپتیدی داخلی هضم میکند.[6]
شکاف ترجیحی: باقیماندههای آبگریز و آروماتیک در موقعیتهای P1 و P1'. پیوندهای Phe-Val، Gln-His، Glu-Ala، Ala-Leu، Leu-Tyr، Tyr-Leu، Gly-Phe، Phe-Phe و Phe-Tyr را در زنجیره β انسولین میشکند. این آنزیم در پیوندهای والین، آلانین یا گلیسین نمیشکند.[7] Z-L-تیروزیل-L-فنیلآلانین، Z-L-گلوتامیل-L-تیروزین یا Z-L-متیونیل-L-تیروزین ممکن است به عنوان سوبسترا برای هضم پپسین استفاده شوند.[7][8] پپسین توسط چندین پپتید حاوی فنیلآلانین مهار میشود.
یادداشت آنالیز
E1%/280=14.7
pH بهینه 2-4 است. در اوره 4 مولار و گوانیدین هیدروکلراید 3 مولار فعال است. در دمای 60 درجه سانتیگراد پایدار است. پپسین در pH 8.0 تا 8.5 به طور برگشت ناپذیر غیرفعال میشود.
پروتئین با E1%/280 تعیین میشود.
سایر یادداشتها
یک واحد، ΔA280 معادل 0.001 در دقیقه در pH 2.0 در دمای 37 درجه سانتیگراد تولید میکند که به عنوان محصولات محلول در TCA با استفاده از هموگلوبین به عنوان سوبسترا اندازهگیری میشود. (حجم نهایی = 16 میلیلیتر. مسیر نور = 1 سانتیمتر مربع.)